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分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域

分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域
分子篩層析也并非一無(wú)是處,其應(yīng)用領(lǐng)域主要包括以下方面:
1)脫鹽:
高分子(如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質(zhì),可以用分子篩層析除去,這一操作稱(chēng)為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速,蛋白質(zhì)和酶類(lèi)等在脫鹽過(guò)程中不易失活,樣品體積可達(dá)柱床體積的25%-30%,為了防止蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度降低會(huì)形成沉淀吸附于柱上,一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類(lèi)緩沖液使層析柱平衡,然后加入樣品,再用同樣緩沖液洗脫,收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發(fā)性鹽類(lèi)。
2)分離提純:
分子篩層析已廣泛用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質(zhì)的分離提純。
3)測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量:
用一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品放入同一凝膠柱內(nèi),在同一條件下層析,記錄每一分鐘成分的洗脫體積,并以洗脫體積對(duì)分子量的對(duì)數(shù)作圖,在一定分子量范圍內(nèi)可得一直線(xiàn),即分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定未知物質(zhì)的分子量時(shí),可將此樣品加在測(cè)定了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的凝膠柱內(nèi)洗脫后,根據(jù)物質(zhì)的洗脫體積,在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出它的分子量。
4)高分子溶液的濃縮:
通常將Sephadex G-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中,這時(shí)水分和低分子量的物質(zhì)就會(huì)進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部的孔隙中,而高分子物質(zhì)則排阻在凝膠顆粒之外,再經(jīng)離心或過(guò)濾,將溶脹的凝膠分離出去,就得到了濃縮的高分子溶液。

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