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凝膠電泳染色:使用什么

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于凝膠電泳染色:使用什么:
    
電泳是鑒定和分離大分子的常用實(shí)驗(yàn)室程序。它是由莫斯科的一位大學(xué)科學(xué)家于1800年代初次觀察到的。像許多發(fā)現(xiàn)一樣,這是偶然的,但事實(shí)證明它對(duì)許多研究場(chǎng)景都有用。通過(guò)施加電流,技術(shù)人員可以使用顆粒的負(fù)電荷或正電荷,使它們遷移穿過(guò)瓊脂糖凝膠等多孔基質(zhì)。當(dāng)樣品中存在帶正電的分子時(shí),它們將向負(fù)電流(陰極)蠕變,而帶負(fù)電的分子將向正電流(陽(yáng)極)遷移。
除了電源和凝膠外,該動(dòng)力學(xué)測(cè)試還需要緩沖液以幫助防止溫度和pH值過(guò)高。所用凝膠的類型取決于樣品和應(yīng)用。凝膠是“固體”,但多孔。在凝膠內(nèi),較大的分子將更慢地移動(dòng),而較小的分子將快速移動(dòng)。因此,分子大小是分離樣品和鑒定分子的另一種方法。
那么,既然我們了解了電泳的動(dòng)力學(xué),我們?nèi)绾慰创@些粒子在何處移動(dòng)?這些分子可能是“宏觀”的,但它們?nèi)匀惶《鵁o(wú)法用肉眼觀察。我們實(shí)驗(yàn)的后一個(gè)必需成分是污點(diǎn)。一組染料使我們可以直觀地看到顆粒所經(jīng)過(guò)的路徑。從那里,我們可以捕獲圖像以記錄結(jié)果。
DNA凝膠污漬
存在幾種在凝膠電泳過(guò)程中對(duì)核酸染色的選擇。溴化乙錠(EtBr)是常用的DNA染料。它是一種結(jié)合DNA的嵌入劑,當(dāng)暴露于紫外線下時(shí)其熒光增加20倍。EtBr是便宜的DNA染色劑,是許多研究實(shí)驗(yàn)室的理想選擇。但是,EtBr小心使用,因?yàn)樗且阎恼T變劑。另外,EtBr要求暴露在紫外線下才能看到,但是會(huì)發(fā)生分子損傷。當(dāng)將DNA用于下游應(yīng)用如克隆時(shí),這就提出了一個(gè)問(wèn)題。
核酸染色,通過(guò)紫外線觀察。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)出替代的DNA染料,例如SYBR Safe,它們不具有與EtBR相同的誘變特性。SYBR Safe不被認(rèn)為是危險(xiǎn)的,可以使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)污水處理系統(tǒng)進(jìn)行處理。此外,它在藍(lán)光下發(fā)出熒光,從而防止了使用紫外線時(shí)發(fā)生的DNA損傷。
已顯示許多DNA染色劑可抑制聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。當(dāng)需要高PCR效率(例如實(shí)時(shí)定量PCR)時(shí),可行的DNA染料應(yīng)為Eva Green。與其他常見(jiàn)的電泳染料相比,它在較小程度上限制了PCR。Eva Green還比EtBr等傳統(tǒng)污漬更安全。
蛋白質(zhì)凝膠污漬
與DNA凝膠類似,蛋白質(zhì)凝膠染色有多種選擇。兩種常見(jiàn)的污漬是考馬斯亮藍(lán)和銀染??捡R斯是一種陰離子染料,可與蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合。一旦去除多余的污漬,蛋白質(zhì)條帶將顯示為藍(lán)色條帶。考馬斯染色由于其易用性和可承受的成本而成為普遍的蛋白質(zhì)染色方法。
相反,銀染色比考馬斯亮靈敏,可以檢測(cè)相對(duì)少量的蛋白質(zhì)。但是,靈敏度是有代價(jià)的,因?yàn)殂y染劑還可以與多糖和核酸結(jié)合,從而在銀染的凝膠上產(chǎn)生雜散帶。
 
電泳凝膠和緩沖溶液中的化學(xué)物質(zhì)也會(huì)影響染料的性能,因此您的家庭作業(yè)也是如此。根據(jù)您實(shí)驗(yàn)室中的樣品,應(yīng)用和記錄的測(cè)試結(jié)果,選擇具有高潛力的良好測(cè)試結(jié)果。使用有關(guān)樣品和試劑制備,染料量,膠凝時(shí)間和溫度,脫色,存儲(chǔ)和其他任務(wù)的佳實(shí)踐。后,記住你的手套!
 
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于凝膠電泳染色:使用什么。
 
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