那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)方法經(jīng)典攻略(一):
不迷路
在結(jié)構(gòu)研究和體外生物化學(xué)分析等很多實驗應(yīng)用中都需要用到純化蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可以從組織中獲取,亦或更經(jīng)常的是從模式生物中過量表達獲得,如細*菌、酵母或哺乳動物細胞培養(yǎng)等。蛋白質(zhì)純化主要是根據(jù)它們各不相同的物理性質(zhì)來從原料進行分離,其目的就是希望能浪費*少的雜蛋白,獲得*多的功能蛋白質(zhì)。一個好的蛋白質(zhì)的純化過程必須要將其純化工藝步驟優(yōu)化至*少。
蛋白質(zhì)純化工藝的建立
緩沖液體系
Tris 25°C的pKa值是8.06,表示當(dāng)pH=8.06,50%的Tris是質(zhì)子化(酸式結(jié)構(gòu)),50%是去質(zhì)子化(堿式結(jié)構(gòu))。
關(guān)于緩沖液的一個常規(guī)原則是,其pH值應(yīng)保證在pKa值左右1個pH值單位范圍內(nèi),從而保證其具有良好的緩沖能力。如此可以保證同時有足夠的以酸式結(jié)構(gòu)和堿式結(jié)構(gòu)存在的分子在加入 H+ 或者 OH- 時可以將它們中和。這樣,緩沖液就可以防止pH變化導(dǎo)致的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性改變。
1、水溶性
2、化學(xué)穩(wěn)定性
3、在所需pH范圍內(nèi)良好的緩沖能力
4、與分析和實驗應(yīng)用條件具有良好的兼容性
5、與其他溶質(zhì)具有良好的兼容性
很多物質(zhì)都可以用于生物緩沖液。*常使用的緩沖液成分通常具有接近中性的pKa值,可在生理pH值范圍左右使用。表1列出了4種*常用的生物緩沖液、各自的pH值應(yīng)用范圍及各自可能對蛋白質(zhì)純化過程產(chǎn)生影響的優(yōu)缺點。為保證足夠的緩沖能力,這些緩沖液的濃度通常為25mM。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)方法經(jīng)典攻略(一)。
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