蛋白純化系統(tǒng)原理

1.分子親和純化
分子親和純化是利用目標(biāo)蛋白與特定配體之間的特異性相互作用進(jìn)行純化的方法。在蛋白純化系統(tǒng)中，可以通過(guò)在柱內(nèi)填充具有親和性配體的樹(shù)脂來(lái)實(shí)現(xiàn)分子親和純化。當(dāng)樣品通過(guò)柱時(shí)，目標(biāo)蛋白與配體發(fā)生結(jié)合，其他雜質(zhì)蛋白被洗脫。隨后，通過(guò)改變洗脫緩沖液的條件，使目標(biāo)蛋白從親和樹(shù)脂上解離下來(lái)，實(shí)現(xiàn)純化。
2.離子交換純化
離子交換純化是利用蛋白與固定帶電基團(tuán)之間的電荷相互作用進(jìn)行純化的方法。在蛋白純化系統(tǒng)中，可以通過(guò)在柱內(nèi)填充具有帶電基團(tuán)的離子交換樹(shù)脂來(lái)實(shí)現(xiàn)離子交換純化。樣品通過(guò)柱時(shí)，目標(biāo)蛋白與樹(shù)脂表面的帶電基團(tuán)發(fā)生電荷相互作用，使目標(biāo)蛋白被吸附在樹(shù)脂上。隨后，通過(guò)改變洗脫緩沖液的離子強(qiáng)度或pH值，使目標(biāo)蛋白從離子交換樹(shù)脂上解離下來(lái)，實(shí)現(xiàn)純化。
3.凝膠過(guò)濾純化
凝膠過(guò)濾純化是利用蛋白分子的大小差異進(jìn)行分離純化的方法。在蛋白純化系統(tǒng)中，可以通過(guò)在柱內(nèi)填充具有特定孔徑的凝膠顆粒來(lái)實(shí)現(xiàn)凝膠過(guò)濾純化。樣品通過(guò)柱時(shí)，目標(biāo)蛋白由于其分子大小與凝膠孔徑的匹配而通過(guò)，而大分子的雜質(zhì)被凝膠顆粒阻滯在柱中，從而實(shí)現(xiàn)純化。