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蛋白純化通用問題(二)

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化通用問題(二)。

7、填料如何儲(chǔ)存?
答:請(qǐng)參考說明書。大部分填料可以在 4-40℃ 儲(chǔ)存,不可以冷凍,注意北方的冬天有時(shí)候室溫低于零度,運(yùn)輸和儲(chǔ)存應(yīng)避免凍住。儲(chǔ)存過程中,注意避免填料干掉,或低溫產(chǎn)生氣泡。
儲(chǔ)存液 :對(duì)于耐堿的層析介質(zhì),可以使用 0.01M NaOH 作為儲(chǔ)存液 ;對(duì)于不耐堿比如親和介質(zhì),一般是用 20% 的乙醇或 2% 苯甲醇作為儲(chǔ)存試劑。

8、樣品與緩沖液怎么脫氣和過濾?
答:溶液和樣品必須過濾(0.2um或者0.45um的濾膜過濾)和脫氣,可以使用負(fù)壓抽濾瓶過濾,并且在負(fù)壓條件下保持10min脫氣。脫氣的方法還包括:超聲15min以上或者使用注射用水配制緩沖液。對(duì)于小體積樣品的過濾,可以使用高速離心的方式,吸取上清。

9、AKTA系統(tǒng)的清洗和保存?
答:按時(shí)清洗系統(tǒng)或遇到問題時(shí)清洗系統(tǒng)。用1M NaOH ,小流速清洗系統(tǒng)30min,之后立即用0.5M NaCl和去離子水將NaOH沖洗干凈并且系統(tǒng)pH保持在中性。系統(tǒng)長(zhǎng)時(shí)間不使用,需保存在20%乙醇中。

10、如何進(jìn)行柱前壓校準(zhǔn)?
答:取決于柱位閥,斷開所有流路,在system control-system-calibration-歸零。

11、AKTA pure與prime plus的*大耐受壓力?
答:pure 25是20Mpa,pure 150是5Mpa;prime plus 是1Mpa;紫外電導(dǎo)2MPa,PH電極耐壓0.5MPa。

12、如何設(shè)置報(bào)警壓力?
答:
系統(tǒng)配有多柱位閥:
可以檢測(cè)柱子的柱前Pre C壓力,柱后Post C壓力,并且計(jì)算出Delta C壓力。
分別設(shè)置Pre Column Pressure和Delta Column Pressure的壓力報(bào)警保護(hù)柱子。

系統(tǒng)無(wú)多柱位閥:
先用管道代替柱子連接設(shè)備,在工作流速下測(cè)定系統(tǒng)本身的壓力,此為空載壓力。
Pre Column Pressure為Max Pre-Column Pressure和Max Delta Column Pressure+空載壓力中較低值。

13、在正確設(shè)置了報(bào)警壓后,層析柱接入AKTA,總是超壓報(bào)警?
答:首先判斷AKTA系統(tǒng)是否本身壓力過高,在線濾膜或者反壓閥堵塞,正常情況下反壓閥空跑系統(tǒng)壓力為0.2左右。如果系統(tǒng)沒有問題,接入柱子出現(xiàn)超壓,可能是柱子堵塞或者連接柱子的管線折彎造成超壓,調(diào)整連接管線或者按說明書方式清洗層析柱。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化通用問題(二)。
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