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AKTA蛋白純化系統(tǒng)的一般操作
AKTA蛋白純化系統(tǒng)的一般操作:1、開機(jī)按位于底部平臺前左側(cè)的ON/OFF 按鈕,打開色譜系統(tǒng),然后打開電腦電源。待儀器自檢完畢(CU950上面的3個指示燈完全點(diǎn)亮并不閃爍)。雙擊桌面上UNICORN圖標(biāo),進(jìn)入操作界面。UNICORN的操作界面分為四個窗口(Fig 3)
Fig 3、Unicorn的操作界面
2、準(zhǔn)備工作溶液和樣品所有的工作溶液和樣品需要經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾,樣品也可高速離心后取上清備用。當(dāng)緩沖液中含有有機(jī)溶劑(如乙腈、甲醇),需在使用前用低頻超聲脫氣10min。
3、清洗及管道準(zhǔn)備首先將A泵的進(jìn)液管道(A1)放入緩沖液或平衡液中,將B泵的進(jìn)液管道(B1)放入高鹽溶液中,在system control窗口點(diǎn)擊工具欄內(nèi)的manual,選擇 pump→pump wash explorer,選中A1,B1管道為ON, execute。泵清洗將自動結(jié)束。(Fig 4)
Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作4、安裝層析柱在manual里選擇pump→flow rate,輸入一定的低流速(Fig 5),insert;選擇Alarm&mon→alarm pressure,設(shè)置high alarm(輸入填料或?qū)游鲋哪褪軌毫?,以較低者為設(shè)置值,具體可在填料說明書或?qū)游鲋f明書中查到),insert,execute(Fig 6) 。待InjectionValve的1號位管道流出水后接入柱子的柱頭,稍微擰緊后將柱下端的堵頭卸掉接入管道連上紫外流動池。
Fig 5、AKTA Explorer的流速設(shè)定操作 Fig 6、AKTA Explorer的限壓設(shè)定操作5、開始純化:1)在柱子平衡好之后(電導(dǎo),pH的數(shù)值和變化趨勢穩(wěn)定)即開始上樣了。此時應(yīng)將紫外調(diào)零(Fig 7),選擇Alarm&mon→autozero,exectue。
Fig 7、AKTA Explorer的紫外調(diào)零操作2)具體上樣方式:AKTA系統(tǒng)的上樣方式比較靈活,可以根據(jù)具體樣品的條件進(jìn)行上樣,包括用樣品環(huán)上樣、用系統(tǒng)泵上樣、用樣品泵上樣等,這里以用系統(tǒng)泵上樣為例簡單介紹上樣過程。點(diǎn)擊pause,將A1放入樣品中,點(diǎn)擊countine,待樣品上完后,再將A1放入到平衡液中繼續(xù)清洗柱子。
3)洗脫:上樣后用緩沖液盡量將穿透峰洗回基線。在manual里選擇pump→gradient,
按照自己的工藝選擇targetB(100%)和length(10CV)(Fig 8)。
Fig 8、AKTA Explorer的洗脫條件設(shè)定操作4)設(shè)定收集:選擇Frac→fractionation_900,輸入每管收集體積,exectue(Fig 9)。結(jié)束固定體積收集選擇Frac→fractionation_stop_900,exectue(Fig 10)
Fig 9、AKTA Explorer的組分收集設(shè)定操作 Fig 10、AKTA Explorer的組分收集停止設(shè)定操作5)清洗泵及卸下層析柱:
將A1和B1入口放入純水中,啟動pump wash purifier功能沖洗A泵和B泵及整個管路。然后再將A1和B1入口放入20%乙醇中,同樣操作將乙醇沖滿整個管路保存。再給柱子一個慢流速,設(shè)置系統(tǒng)保護(hù)壓力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的時候?qū)⒍骂^擰上,再拆柱子的上端,再擰上上端的堵頭。整個過程中應(yīng)防止氣泡進(jìn)入。
6)關(guān)閉電源:
從軟件控制系統(tǒng)的開始一個窗口unicorn manager點(diǎn)擊退出,其他窗口不能單獨(dú)關(guān)閉。然后關(guān)閉AKTA主機(jī)電源,關(guān)閉電腦電源。
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